灭菌与消毒的技能
指在微生物培 养实验中,进行灭菌(杀灭一定环境中 所有的微生物)和消毒(消灭病原菌或 有害微生物)的技能。微生物培养实 验,各项操作均需在无菌的条件下进 行,灭菌与消毒是微生物实验的基础, 是生物教师应掌握的基本技能之一。灭菌与消毒的方法很多,可以分为物理法和化学法两大类。物理的方法包括:加热灭菌、过滤除菌、紫外线灭菌等。化学方法主要是利用福尔马林、酒精、石炭酸、来苏尔等有机或无机的化学药品对实验室用具或其它物体进行 灭菌与消毒。
运用加热灭菌的基本方法和要求是:①高压蒸汽灭菌法:为湿热灭菌法之一,是微生物实验中常用的一种灭菌法。用热蒸汽加压至1公斤/厘米2或15磅/英寸2(约121℃)持续15—30分钟,即可杀死一切微生物及其芽孢。一般培养基、玻璃器皿及传染性标本等都可以用此法灭菌。操作要求是:打开灭菌锅盖(用压力锅代替也行),加入适量水,将灭菌物品放入锅内,关严灭菌锅盖,使蒸汽锅密闭,打开放气活塞,加热至开始产生蒸汽后10分钟,关紧放气活塞,当压力达到一个大气压,温度为121℃时,即为灭菌开始。控制热源,维持所需时间后停止加热,当压力降至0时,打开排气阀和灭菌锅盖取出材料。运用高压蒸汽灭菌法必须注意:灭菌是否彻底的一个重要关键是压力上升之前,必须先用蒸汽将锅内的冷空气完全驱尽,否则,压力表指向15磅/英寸2时,锅内温度却还只有100℃,往往会造成灭菌不彻底;灭菌结束,一定要待压力降为0磅时,才能打开锅盖;锅内物品不宜放得太挤,以免影响蒸汽的流通和灭菌效果。②间歇灭菌法:即常压蒸汽灭菌法。适用于在100℃以上时容易被破坏的培养基的灭菌。间歇灭菌的温度和时间是100℃、30分钟。在此温度和时间内能够杀灭一切细菌的营养体,但不能杀死芽孢,反复进行时,则可以在间歇时间里,使芽孢发育成营养体,最后达到彻底灭菌的目的。运用此法的步骤要求是:将需要灭菌的物品置 入灭菌锅内(一般的蒸锅都可以),加 热至100℃,30分钟,杀死细菌营养 体。冷却后,置37℃温箱中过夜,使其 中的细菌芽孢发育成营养体。再以同 法加热,反复三次,即可杀灭所有的细 菌和芽孢。运用间歇灭菌法必须注意: 此法使用的工具虽然简单,但所需要 的时间长,一般能用高压蒸汽法灭菌 的,均不采用间歇灭菌法。③干热灭菌 法:最简单的干热灭菌是灼烧法。即利 用火焰直接把微生物烧死。此法灭菌 迅速彻底,适合于接种环、试管口的灭 菌。实验室中常用的干热灭菌法是指 用热空气灭菌。即把待灭菌的物品均 匀地放在恒温干燥箱内,加热至 160—170℃,维持2小时。操作方法和 要求参见使用烘箱、电热恒温箱的技 能。运用此法灭菌必须注意:此法只适 宜玻璃器皿、金属用具等灭菌,含有水 份的物质如生物培养基等不可用此法 灭菌。
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