冰冻切片法

指以水为包埋剂,利 用致冷剂或冷冻装置,将经过固定或 新鲜的组织块进行冰冻后在切片机上 切成薄片制成玻片标本的方法。此法 不需要脱水、透明或浸蜡,能在10— 15分钟内完成从取材到制成切片的 一切步骤,并能保存组织内某些易被 有机溶剂溶解的物质,防止组织的收 缩和变形。适合于脂肪、神经组织和其 它组织化学的制片。
运用冰冻切片法制片的步骤和要 求是:第一步取材与固定。新鲜的组织 块可不经过固定处理直接进行冰冻后 切片。为了切出薄片,一般多采用 10%福尔马林液固定。第二步切片。首 先要安装好切片机,将标本台用水湿 润到适宜程度后,将组织块放在上面, 并使组织块冻结,同时调好切片的厚 度和转动标本台的升降把手,使冰冻 的组织块上端与切片刀口相接为止。 当组织块表面呈轻微的溶化时即可开 始切片,切下的切片附着在刀片上,可 用湿润的毛笔将它扫在盛水的培养皿 中,切片要平推在水面或沉于水底。第 三步贴片。要选择较好的切片贴在载 玻片上。蛋白甘油贴片法是先在载玻 片上涂一层蛋白甘油(将蛋清调打成 雪花状泡沫,用双层纱布过滤出透明 的蛋白液,加等量甘油配成),然后将 载玻片插入水中,把切片托起,用解剖 针拨正位置。明胶贴片法是将切片浸 入1%明胶溶液中几分钟,用载玻片 托起,拨正位置,再浸入福尔马林液中 数分钟,使明胶固定后用蒸馏水洗去 福尔马林。第四步染色与封藏。根据制 片需要选择适合于制片目的染色液和 封藏剂,封藏保存。
使用冰冻切片法制片必须注意: ①经固定过的组织块要水洗后才能进 行冰冻切片。②容易破碎的组织块,在 切片前要用明胶包埋。③冰冻切片可 以不贴片进行游离染色,也可以贴片 后再染色。④用明胶包埋的切片,遇 90%以上的酒精时会引起收缩,在染 色和封藏时最好用水溶性的染料和封 藏剂。

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