制作生物玻片标本的技能
指将细 小的生物体,或生物体的一部分器官 组织,用一定方法处理后,封藏于载玻 片和盖玻片之间,制作成标本的技能。 其制作方法有两大类。一类是切片法, 是用刀片或切片机将各种组织切成薄 片制成玻片标本的方法。包括徒手切 片法、石蜡切片法、火棉胶切片法和冰 冻切片法。一类是非切片法,是将小形 生物体或较大生物体的一部分不用刀 切成薄片而制成玻片标本的方法。包 括整体装片法、涂片法、压片法、分离 法和磨片法。玻片标本薄而透明,借助 显微镜能够观察生物的细微结构和内 部构造,永久性玻片标片保存十几年 以上,仍能清晰地显现出各种细微结 构。掌握这一技能,对细胞学、组织学、 胚胎学、病理学的教学和科研有着十 分重要的作用。
运用制作玻片标本技能的基本步 骤和要求是:①取材。要根据需要观察 和研究的内容,选取制作玻片标本的 材料。②固定。将经过选择的材料立即 用物理或化学的方法进行处理,以保 持材料原有的特征和结构,有利保存 和适于制片操作。物理方法固定可采 用干燥、高热和低温骤冷等。化学方法 固定是用化学试剂配制成固定液固 定。③染色。利用生物染色剂使玻片标 本的组织或细胞的各种不同组成成分 染上不同颜色,产生不同的折光率,使 各部分结构在显微镜下清晰可辨。动 物组织常用苏木精、曙红染色法,植物 组织常用番红、固绿染色法。④封藏。 将处理好的材料,用封藏剂封藏在载 玻片和盖玻片之间保存起来。常用封 藏剂是树胶和甘油等。如果制作切片 标本,还要增加一个切片的主要步骤, 再根据需要增加脱水、透明等步骤。
运用制作玻片标本的技能必须注 意:①制作玻片标本的材料要尽可能 新鲜,切取材料时尽量不损伤材料,并 详细记录材料名称、采集时间和地点。 ②材料要及时固定,以防止组织自溶 和腐败。材料与固定液之比为1∶20, 要在取材前根据材料的性质和制片目 的选择合适的固定液。③染色前要了 解染色液的性质,染色后常在同样的 溶剂中洗去多余的染料。例如番红溶 解在50%的酒精中,冲洗也要在50% 的酒精中进行。在两重染色时,所用的 染色液要有正确的先后次序。如苏木 精要用在番红之前,番红要用在亮绿 或固绿之前。④使用无水封藏剂,如树 胶、香柏油等,标本一定要经过彻底脱 水后才能封藏,封藏的标本可以保存 数十年。含水封藏剂如甘油,阿拉伯胶 等,标本不需脱水即可封藏,但不能长 期保存。切片进行脱水时,要在35%、 50%、70%、83%、95%、100%各级浓 度的酒精中逐级顺序进行,脱水太快, 不仅脱不干净,还会损坏组织。脱水至 纯酒精时,要更换二次,每次30分钟 到1小时,如需过夜,要停在70%的 酒精中。
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